細胞實驗步驟：

一、細胞復蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺，紫外燈照射30min后再通風30min；

2.預熱培養基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

4.將凍存細胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

7.吸取9ml培養基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養基重懸細胞，將細胞懸液轉移到培養瓶內，補加適量培養基，輕輕晃動培養瓶使細胞分布均勻，并做好標記；

13.在顯微鏡下觀察復蘇的細胞密度及狀態；

14.將細胞放回二氧化碳培養箱中靜置培養。

商品屬性：

產品介紹

RMPI 1640培養液是由Moor等研究成功的，最初為培養小鼠白血病細胞的需要而準備。開始的配方特別適合懸浮細胞的生長，主要針對淋巴細胞，后經多次改良從RPMI 1630、1634，而至RMPI 1640。其組成較為簡單，但可以適應很多種類細胞的生長。不僅腫瘤細胞，而且很多正常組織細胞可用RMPI 1640進行體外培養。實驗室一般將RMPI 1640作為實驗和細胞維持的基本培養液，目前RMPI 1640是應用較為廣泛的培養基之一。本培養基為無添加葡萄糖RMPI 1640基礎培養基。

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個月；?

注意事項：

僅限科研用。

培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細胞培養步驟：

?細胞復蘇?：

從液氮罐中取出凍存細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細胞轉移到含有新鮮培養基的培養皿中，輕輕搖動使細胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養箱中培養。

?細胞換液?：

吸除或倒掉培養皿內的舊培養液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細胞，以去除懸浮在細胞表面的碎片，重復幾次。

加入新的培養基。

?細胞傳代?：

當細胞長到80%~90%時，進行傳代。

吸除或倒掉瓶內舊培養液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細胞表面。

將培養瓶放入37℃培養箱中靜止幾分鐘，觀察細胞變化。當細胞間隙增大后，加入含有血清的培養液終止消化。

吹打細胞使其成為懸液，轉移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細胞培養液重懸細胞。

按比例分裝到新的培養皿中，補加新鮮培養基。

做好標記，放入37℃、5%CO2的培養箱中培養。

?細胞凍存?：

選擇對數生長期的細胞進行凍存。

將細胞轉移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細胞。

將細胞轉移到冷凍保存管中，標記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉至液氮罐保存。

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