NADP磷酸酶(NADPase)測試盒微量法

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商品屬性：

測定意義：

測定原理：

NADPase 能夠催化 NADP+水解為 NAD+和無機磷的反應，通過測定無機磷的量來測定 NADPase 活性。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 15 mL×1 瓶， 4℃保存。

試劑二：粉劑×4 支，-20℃保存；用時加入 1 mL 試劑一充分溶解備用，現配現用。

試劑三：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃可保存一周。

試劑四：粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時加入 25mL 蒸餾水，溶解后 4℃可保存一周。

試劑五：液體 25mL×1 瓶，室溫保存。

試劑六：10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。

0.5μmol/mL 標準磷應用液配制：將試劑六 20 倍稀釋，即取 0.5mL 試劑六加 9.5 蒸餾水，充分混勻。

定磷試劑的配制：按 H2O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷試劑應為淺黃色，若無色則試劑失效，若污染，定磷劑現用現配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

樣本的前處理：

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。810min，取上清，置冰上待測。

訂購流程:

1、訂購前,請與銷售員核對產品中文名稱/CAS號/英文名稱等。

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5、我司提供完善的售后服務,使用過程中如有任何疑問,可提供技術指導。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 660nm，蒸餾水調零。

2、酶促反應（在 EP 管中加入下列試劑）

37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）準確反應 30min 后，95℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，10000g5min，取上清

3、定磷（在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）

注意事項：

1、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格，要沒有一點磷，若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液，干凈，要先用洗潔精加水煮，再用自來水沖，最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測成

2、標準管、空白管和對照管只要做一次即可。

NADPase 酶活性計算：

1、按組織蛋白濃度計算：

定義：每小時每毫克組織蛋白 NADPase 分解 NADP 產生 1μmol 無機磷的量為一個 NADPase 活力單位。

NADPase (μmol/h/mg prot)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷(V 樣×Cpr)÷T=5×(A 測定管-A 對A 空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計算：

定義：每小時每 g 組織 NADPase 分解 NADP 產生 1μmol 無機磷的量為一個 NADPase 活力單位。

NADPase (μmol/h /g 鮮重)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管）×V 總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=5×(A

管)÷(A 標準管-A 空白管)÷WC 標準管：標準管濃度，0.5μmol/mL；V 總：酶促反應總體積，0.2mL；V 樣：加入樣本體積

V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，0.5 小時；Cpr：樣本蛋白質濃度mg/mL；W：樣本鮮重，g。

生化試劑盒的使用注意事項：

選擇合適的試劑盒：根據實驗目的和檢測對象選擇合適的試劑盒，確保實驗的準確性和可靠性。

嚴格遵循說明書：按照試劑盒的說明書進行操作，避免誤用或浪費。

注意保存條件：按照試劑盒的保存條件進行妥善保存，避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。

控制實驗條件：在實驗過程中嚴格控制實驗條件，如溫度、時間、pH值等，以確保實驗結果的穩定性。

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