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elisa酶聯免疫試劑盒價格分析彎曲桿菌的培養和保存方法

更新時間:2017-08-22點擊次數:714

一、elisa酶聯免疫試劑盒價格基本原理

彎曲桿菌(Campylobacter spp.)是一種重要的食源性病原菌。彎曲桿菌屬(Campylobacter genus)包括6個種及若干亞種。其中空腸彎曲桿菌(C. jejuni)、結腸彎曲桿菌(C. coli)和胎兒彎曲桿菌(C. fetus)占所有從人體分離的99%(空腸彎曲桿菌占90%)。空腸彎曲桿菌為革蘭氏陰性微需氧細菌。其培養條件苛刻,在空氣中不能生長,在普通培養基上也難以培養。在微需氧條件下(85 % N2, 5% O2 和10% CO2)在凝固血清和血瓊脂培養基上培養48小時可見無色半透明的小菌落,zui適生長溫度為42°C,在37°C下也能培養,但生長速度較慢。彎曲桿菌增菌用布氏肉湯液體培養基。常用的生長培養基為Skirrow固體培養基和Camp-BAP固體培養基。彎曲桿菌耐藥實驗所用培養基為MH固體培養基。為了保證彎曲桿菌的生長,通常需要在固體培養基中加入5%(v/v)的脫纖維裂解羊血。本實驗簡述彎曲桿菌所用培養基、培養條件、菌株分離注意事項和菌株保存方法。

二、彎曲桿菌的培養

1、培養基的配制

1)、Camp-BAP固體培養基的配制:
稱取8.92g培養基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入200ul添加劑A、200ul添加劑B和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。(添加劑A和B為購買附帶)。

2)、Skirrow固體培養基的配制:稱取8.5g培養基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。

FBP原液配置:分別稱取0.5g焦亞*、0.5g丙酮酸鈉和0.5g硫酸亞鐵,溶于20ml蒸餾水中,濾膜過濾除菌,放置4°C冰箱可保存一周。

3)、布氏肉湯增菌液的配制:

稱取28.1g布氏肉湯粉末,溶解于1000ml蒸餾水中高壓滅菌,冷卻后備用。

2、增菌培養

將新鮮食品,如雞肉,減碎,取5g置于50ml離心管中,加入布氏肉湯至液面覆蓋雞肉樣品,擰緊離心管,先在37°C下預增菌4小時,在加入100 ul頭孢哌酮(30mg/ml),并顛倒混勻,放置在微需氧培養箱中42°C培養48小時。

3elisa酶聯免疫試劑盒價、菌株保存方法

挑取單克隆菌株在Skirrow固體培養基上平板劃線,放置在42°C的微需氧環境下培養48小時,用滅菌棉簽從平板上刮下長出的菌落,懸浮在50%甘油的布氏肉湯保種液中,置于-80°C超低溫保存。在-20°C冰箱中保存效果較差,存放一周后細菌復蘇率即顯著下降。此外,保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。

三、elisa酶聯免疫試劑盒價格注意事項

(1)、由于彎曲桿菌是微需氧的細菌,生長條件苛刻,存在分離率低、培養復雜且難以保存的問題。從食品中分離彎曲桿菌首先要保證食品的新鮮度,此外還可通過布氏肉湯增菌步驟來提高分離率。

(2)、彎曲桿菌的生長力較弱,容易受到大腸桿菌、沙門氏菌等雜菌的污染,因此微生物實驗操作過程應保持無菌,為降低雜菌污染,也可在培養基中加入萬古霉素和多粘菌素B。

(3)、彎曲桿菌培養用的血平板應保持新鮮。脫纖維裂解羊血在4°C條件下可保存兩周,制備好的血平板在4°C條件下zui多保存一周。
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